【瑞士步琦】【应用】同一系统上使用Flash和制备HPLC色谱纯化多肽

步琦 2025-05-29 | 阅读：72

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同一系统上使用

Flash和制备HPLC色谱纯化多肽

色谱应用

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简介

固相多肽合成（SPPS）是科学研究、临床和商业合成领域中最常用的多肽合成路径。由于反应通常产生多种长度的肽链，所以这些反应混合物的提纯非常具有挑战性。使用大孔反相填料色谱柱和制备 HPLC 能够得到高纯度的结果，所以常用于此类纯化。不过，多肽反应通常很复杂，含有很多杂质。将此样品引入昂贵的制备 HPLC 柱和系统中会产生额外的消耗，而且需要较多时间进行样品纯化。Pure Prep 系统既能运行制备 HPLC 也能运行 Flash 色谱模式，令您从容选择使用制备 HPLC 还是更经济的 Flash 色谱。FlashPure 大孔 Flash 柱填装高效的 20μm 粒径的填料，分离度高，这是分离很靠近的化合物分子诸如多肽等特别需要的。在此我们证明，如何在同一系统上使用 FlashPure Flash 柱和 HPLC 柱纯化复杂的多肽反应物，并使最终纯度超过95%。

实验材料和方法

样品	样品1（Flash色谱）	样品2（制备HPLC）
多肽混合物	25mg 反应混合物	15mg 反应混合物
目标多肽链长	20 个氨基酸	15 个氨基酸
多肽序列	CQQYNRPYXXXGGTKLEIKR-NH2	CAKHYYYGGXXXMDY-NH2

纯化	Flash 色谱	Prep 色谱
仪器系统	Pure flash 模式	Pure Prep 模式
Flash 柱芯/色谱柱	FlashPure WP C18 12g	Vydac 150HC，22×150mm，10um
梯度/检测器	A=水 B=乙腈+0.1%TFA	A=水 B=乙腈+0.1%TFA
进样模式	液体进样	液体进样

分析	分析型 HPLC
系统	Agilent 1200
色谱柱	Kromasil C18 100×4.6mm，3um
流动相	A=水+0.1%TFA B=20%水，80%乙腈+0.1%TFA
梯度	样品1：20分钟内10-50%B 样品2：20分钟内15-55%B
检测波长	UV214nm
进样模式	液体进样-多种进样体积

结果与讨论

纯度结果	纯化前纯度	纯化后纯度
样品1（Flash 色谱纯化）	58.5%	95%
样品2（Prep 色谱纯化）	55.9%	98.9%

结论

通过以上实验证明：使用反相 Flash 柱和 HPLC 色谱柱，成功地在同一系统上进行了多肽纯化，得到纯度超过 95% 的馏分。高效大孔 Flash 色谱填料提供了堪比制备 HPLC 色谱柱水平的纯度，Pure Prep 系统既能够运行制备 HPLC 也能运行 Flash 色谱模式，您可以自如选择使用制备 HPLC 或更经济的一次性 Flash 色谱柱。

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