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Biochrom30+氨基酸分析仪检测石斑鱼中水解氨基酸

大昌洋行(上海)有限公司(大昌华嘉)  2019-09-16  点击233次

Biochrom30+氨基酸分析仪检测石斑鱼中水解氨基酸

摘要:

以石斑鱼为原料,使用Biochrom30+全自动氨基酸自动分析仪对其肌肉的氨基酸组成进行分析。结果表明石斑鱼肌肉中氨基酸总量的质量百分比为17753.114mg/100g,必需氨基酸(不含色氨酸)占氨基酸总量的40.63%,鲜味氨基酸占氨基酸总量的38.52%。

  1. 样品前处理

  2. 所用试剂

    1. 浓盐酸,浓度≥36%,优级纯

    2. 6mol/L 盐酸:取500mL 盐酸加水稀释至1000mL,混匀。

    3. 水:去离子水

    4. 苯酚:须重蒸

    5. 17种氨基酸标准品

行号

氨基酸

行号

氨基酸

1

Asp

天冬氨酸

2

Thr

苏氨酸

3

Ser

丝氨酸

4

Glu

谷氨酸

5

Pro

脯氨酸

6

Gly

甘氨酸

7

Ala

丙氨酸

8

Cys

胱氨酸

9

Val

缬氨酸

10

Met

蛋氨酸

11

Ile

异亮氨酸

12

Leu

亮氨酸

13

Tyr

酪氨酸

14

Phe

苯丙氨酸

15

His

组氨酸

16

Lys

赖氨酸

17

Arg

精氨酸




  1. 前处理设备

  2. 分析天平:感量分别为 0.0001g和0.00001g。

  3. 水解管:耐压螺盖玻璃试管,体积为25mL

  4. 匀浆机。

  5. 无油真空泵

  6. 干浴水解浓缩仪

  7. 移液管

  8. 0.22um滤膜

  9. 样品制备(参考国标GB 5009.124-2016

    原料鱼手工去除鱼鳞、鱼皮、鱼刺和内脏,采肉后清洗、沥干,在匀浆机中打成肉糜,于-18℃冰箱中冷冻保存,分析时取出解冻后使用。

  10. 试样水解

    称取含蛋白7.5-25mg的试样,加入水解管中,加入15mL 6mol/L盐酸,继续向水解管内加入苯酚3滴~4滴。冷冻3min~5min,接到真空泵的抽气管上,抽真空(接近0Pa),然后充入氮气,重复抽真空-充入氮气3次后,在充氮气状态下拧紧螺盖。 将水解管放入干浴水解浓缩仪中,110°C水解22-24h,冷却、混匀、开管、转移并定容到50ml容量瓶中,用移液管取适量样液,在干浴水解浓缩仪中50°C吹干,必要时加入少许水,重复吹干1-2次,加入3-5mL PH2.2的稀释上机用柠檬酸钠缓冲液溶解,振荡混匀后,吸取溶液通过0.22μm 滤膜后,转移至仪器进样瓶,为样品测定液,供仪器测定用

  11. 分析方法描述(Biochrom 30+

    氨基酸分析仪分析方法参数:

  12. 色谱柱:Biochrom Na型阳离子交换树脂柱,4.6´20cm

  13. 分离程序:

NO.

Time

Temp

Buffer

Pump

Nin

Rec

Commands

1

01:00

48

1

35.0ml/h

ON

OFF


2

00:00

48

1

35.0ml/h

ON

OFF

Reset

3

01:00

48

1

35.0ml/h

ON

OFF

Load

4

06:40

48

1

35.0ml/h

ON

ON


5

13:00

52

2

35.0ml/h

ON

ON


6

01:00

52

5

35.0ml/h

ON

ON


7

16:00

95

5

35.0ml/h

ON

ON


8

04:00

95

6

35.0ml/h

ON

ON


9

04:00

95

1

35.0ml/h

ON

ON


10

09:00

48

1

43.0ml/h

OFF

OFF


11

02:00

48

1

35.0ml/h

ON

OFF


End








  1. 运行时间:经分析时间+再生时间 57min

  2. 反应单元温度:135°C

  3. 检测波长:570nm440nm同时检测。

  4. 样品中氨基酸含量的计算

    样品测定液氨基酸的含量按式(2)计算:

    ci = cs /As ×Ai ……………………(2)

    式中:

    ci ———样品测定液氨基酸i的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);

    Ai ———试样测定液氨基酸i的峰面积;

    As ———氨基酸标准工作液氨基酸s的峰面积;

    cs ———氨基酸标准工作液氨基酸s的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL)。

    试样中各氨基酸的含量按式(3)计算:

    Xi = (ci ×F ×V ×M)/ (m ×109) ×100 ……………………(3)

    式中:

    Xi ———试样中氨基酸i的含量,单位为克每百克(g/100g);

    ci ———试样测定液中氨基酸i的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);

    F ———稀释倍数;

    V ———试样水解液转移定容的体积,单位为毫升(mL);

    M ———氨基酸i的摩尔质量,单位为克每摩尔(g/mol);

    m ———称样量,单位为克(g);

    109 ———将试样含量由纳克(ng)折算成克(g)的系数;

    100 ———换算系数。

    附、石斑鱼分析图谱及做样结果

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